Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者方面缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现去甲自身抗躯到不止现1改进型肝炎临床腹泻的的发展率在成人中期就有良好的描绘，多个去甲自身抗躯无症状的成人中会有70%在血浆转换后10年内患上肝炎，而随访15年的成人这一分之一上升到84%。相比较之下，占临床1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的发病选择性还无法得到充分的分析。

越来越多的人开始应用于分期系统来定义1改进型肝炎的的发展：个躯在不止现多种去甲自身抗躯时带入第1下一阶段，不止现血糖异常时带入第2下一阶段，不止现腹泻时带入第3下一阶段。一些多发去甲自身抗躯无症状的个躯，在1期和2期，的发展更快，并发展为发病的1改进型肝炎。我们前描绘了除此以外在首次检测到多种去甲自身抗躯样本后大概10年无肝炎的较快的发展者，这组病人人数较少，但特征极其明确。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T巨噬细胞中间体在的发展平稳的病人中会整体不存在，但在近期发病和长期存在的肝炎病人中会很容易检测到。这确实确实，与的发展病人相比较，这些病人致病中间体的可调增强。

早期分析确实，尽管可调性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但肝炎病人存在一些特性缺陷，其中会还包括对IL-2的中间体能力减小。此外，肝炎病人中会的震荡CD4+T巨噬细胞确实对可调更加具抵抗性，发挥为震荡T巨噬细胞的诱发向西移动，自然显现不止的Treg和躯外显现不止的其会Treg，以及抗原经历的CD4+T巨噬细胞中会IL-2中间体向西移动。本分析的借此是描绘了CD4+可调性T巨噬细胞(Treg)在一小群以致于平稳的发展者中会的特征，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群为基础的纵向分析，在21岁都有住院的病人亲族中会检查1改进型肝炎的危险因素。我们前描绘了长期平稳的发展者的特征，他们保持多重去甲自身抗躯无症状最多10年，但无法不止现肝炎的临床腹泻，慢性或非展开性致病。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量体内样本的平稳的发展者划定T和B巨噬细胞特性分析。在目前的分析中会，8名慢的发展者(SP组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗躯无症状。所有的发起者都处于1改进型肝炎的发展的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗躯对某些抗原的深红色，然而，一名病人已经处于2期大概6年，但无法不止现临床腹泻，一名病人被诊断为肝炎，该实验者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该供躯展开了直接审计。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多参数流式巨噬细胞练成和T巨噬细胞诱发试验审计供躯中会Treg的阈值、发挥改进型和特性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无行政官员聚类分析，审计Treg发挥改进型。

结果：与肥胖症供躯相比较，来自慢的发展躯的失忆CD4+T巨噬细胞的行政官员聚类辨识，激活的失忆CD4+ Treg阈值上升，与糖皮质激素其会的TNFR相关亚基(GITR)表述上升有关。一名HbA1c升高的病人与的发展平稳者和比如说的结果确实相比较，Treg谱有所不同。特性分析确实，与肥胖症供躯相比较，来自平稳的发展躯的Treg介导的CD4+震荡T巨噬细胞诱发明显受损。发挥为对震荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134表述的诱发上升。

所示1 深入的发挥改进型分析辨识，CD4+Treg亚改进型在慢的发展队列中会上升。由FlowSOM作用于的Treg会议室，聚集在来自所有供躯的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标上物表述鉴定不止10个元簇:失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)应用于9个不同Treg标上作用于的10个元簇的MST。每个终端都有一个集群(100个集群)，更加大的元集群(10个元集群)在终端组外面手工。每个终端中会的饼所示对此单个标上的表述级别。(b)每个元聚类的热所示，以辨识整躯标上表述。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)相比较原子量为每个metacluster盒支线所示(原子量> 0.05%)确定为HD和SP组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T巨噬细胞(l)。橙色格子都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模改进型确认，Treg阈值的上升是的发展平稳的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)来得SP发起者和比如说的HD发起者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的都有性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分离，精心设计FlowSOM群躯。(b) HD(环纹)和SP(星点)组以及供躯SP 606(橙色)中会CD25+ cd127的阈值汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的盒支线所示;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述准确度着色，标记不止彩的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)盒支线所示辨识了在SP(星点)和HD(灰点)组中会，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比较原子量(分之一)。(k)直方所示辨识每个簇的发挥改进型(粉红色)和Treg标上相比较表述与着重表述(金色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。着重与所有其他簇中会标上的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

所示3 与肥胖症献血者相比较，的发展平稳者失忆treg的GITR上升。每个失忆CD4+T巨噬细胞元簇(失忆T巨噬细胞_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +失忆T巨噬细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表述标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热所示(sp606不还包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中会所有HD(粉红色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表述串联，辨识直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供躯还包括，p< 0.05(金色)供躯SP 606和比如说的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从分级门控，从所有HD(粉红色)、所有SP(金色)和SP 606(橙色)串联，辨识直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

所示4 来自平稳的发展的CD4+ treg巨噬细胞遏制震荡CD4+T巨噬细胞的能力减小。SP组用金色的支线和格子对此，HD组用金色的支线和格子对此，橙色的支线/格子对此供躯sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按推论的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，培植3紧接著展开流式巨噬细胞练成检测。(a-d)与CD4+反之亦然者相比较应的treg培植(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。应用于无症状对照(激活的响应巨噬细胞不含treg)计算诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

所示5 震荡CD4+T巨噬细胞对平稳的发展的T巨噬细胞酪氨酸的诱发更加敏感。SP组用金色的支线和格子对此，HD组用金色的支线和格子对此，橙色的支线/格子对此供躯sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按推论的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸巨噬细胞，培植3紧接著展开流式巨噬细胞练成(CD25反染)和巨噬细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱发百分率(b)。(c,d) CD25诱发百分率(c)和CD134诱发百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

得不止结论：我们得不止的得不止结论是，来自平稳的发展子的酪氨酸失忆CD4+Treg在GITR表述中会得到了扩充和独特，忽视了进一步分析Treg在1改进型肝炎风险个躯中会的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28